病毒在肿瘤研究中的应用

加斐

肿瘤研究简介
癌症细胞，又称癌干细胞、肿瘤干细胞，是指具有干细胞性质的癌细胞，也就是具有“自我复制”以及“具有多细胞分化”等能力。通常这类的细胞被认为有形成肿瘤，发展成癌症的潜力，特别是随着癌症转移出去后，产生新型癌症的来源。
“精准医学”时代肿瘤研究模式
1、基因信息挖掘



2、基因功能验证



3、机制探索



基因资源库和操作工具平台



针对肿瘤基因功能学研究，和元生物分子克隆服务平台可以提供：
1、包含15000个人类表达基因的快速构建和验证服务；
2、基因表达、RNAi、Talen、Cas9和基因突变在内的多种载体构建服务；
3、基因组编辑载体DNA切割活性验证服务；
4、结合慢病毒、腺病毒、腺相关病毒和逆转录病毒等多种病毒系统的载体应用。

病毒种类	稳转株制备	难转染细胞	瘤内注射	肿瘤干细胞
慢病毒	√	√	√	√
腺病毒	×	√	√	×
腺相关病毒	×	×	√	×
逆转录病毒	√	×	√	√

注：逆转录病毒可以特异性地感染肿瘤干细胞并稳定传代表达；由于逆转录病毒有较多操作系统，我们一般会根据客户应用推荐相应的系统用于实验。
RNA干扰与基因表达——基因功能研究的经典工具
常用基因表达及RNA干扰载体列表

载体名称	载体种类	应用方式
干扰	pLenti-CMV-EGFP-U6-shRNA	慢病毒	绿色荧光标记感染细胞
pLenti-CMV-EGFP-U6-shRNA	慢病毒	绿色荧光标记,嘌呤霉素筛选
pAdeno-CMV-EGFP-U6-shRNA	腺病毒	绿色荧光标记
pAAV-CBG-EFGP-H1-shRNA	腺相关病毒	绿色荧光标记
表达	pLenti-CMV-EGFP	慢病毒	绿色荧光标记感染细胞
pLenti-CMV-EGFP-PGK-Puro	慢病毒	绿色荧光标记，嘌呤霉素筛选
pLenti-TRE-EGFP-PGK-Puro	慢病毒	Tre诱导表达，嘌呤霉素筛选
pLenti-CMV-GFP-IRES-Puro-miRNA	慢病毒	microRNA表达
pAdeno-mCMV-EGFP-3Flag	腺病毒	腺病毒表达
pAAV-CMV-EGFP	腺相关病毒	绿色荧光标记

应用案例：



TALEN和CRISPR/Cas9基因操作工具



基因敲除及敲除技术原理比较
基因敲除及基因敲减在肿瘤方向研究中的应用方式比较

类别	基本性质	应用
切割酶	序列识别方式	基因突变	表观遗传修饰	转录调控	转录后调控
Cas9	外源表达	gRNA-DNA	√	√	√	√
TALEN	外源表达	蛋白-DNA	√	√	√	√
RNAi	外源表达	RNA-RNA	X	X	X	√

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