Nature Communications| 蛋白磷酸酶2A（PP2A）或将成为 ...

鸣尐

随着肿瘤免疫时代的到来，以抗PD-1单抗为代表的免疫治疗迎来了多个肿瘤治疗领域的变革，然而，仅有部分患者可以从抗PD-(L)1单抗治疗中获得持久疗效和长期生存。目前，肿瘤免疫治疗相关的生物标志物谱，常用如TMB、dMMR/MSI、PD-L1等。其中微卫星不稳定（MSI）肿瘤占散发性结直肠癌（CRC）的15%，其主要是通过表观遗传沉默体细胞的错配修复（MMR）双等位基因。与微卫星稳定型（MSS）肿瘤相比，MSI型结肠癌（CRC）对免疫检查点阻断（ICB）的反应中具有更好预后疗效与生存期，然而，这些临床特征的分子基础尚不清楚。

REFERENCENature Communication


来自中国医药大学的新药开发研究中心洪士杰教授团队在国际知名期刊 Nature Communication上发表研究论文，文中论述dMMR发生的分子机制，即蛋白磷酸酶2A（PP2A）缺失或失活通过两种途径将冷微卫星稳定型（MSS）肿瘤转化为MSI肿瘤。通过这信号通路的改变，PP2A的缺失或者失活能够增加肿瘤中的细胞毒性T细胞的浸润，重塑肿瘤免疫微环境，并且改善对ICB的反应，或将成为提高免疫治疗响应率的重要靶点。
研究表明，由突变或内源性抑制剂引起的pp2a失活，在癌症转化表型的维持中具有重要作用，但其在形成免疫微环境和对ICB的反应中独特的肿瘤内在作用仍不清楚。为了探讨这一问题，作者对pp2A敲除的小鼠结肠癌肿瘤进行免疫荧光分析，发现pp2A敲除后CD8+ T细胞和CD20+ B细胞浸润明显增加，FOXP3+调节性T细胞(Treg)浸润减少，基因集合富集分析也表明细胞因子，趋化因子，IFNγ等表示升高。此外，联合TCGA数据分析共同表明小鼠和人类CRC中pp2a的失活能够改变免疫微环境，包括促进细胞毒性T或B细胞浸润和抑制肿瘤中Treg细胞表达。
实验部分
#01
MSI介导免疫细胞浸润增加验证
作者利用TissueGnostic公司的TissueFAXS扫描成像系统分别对类器官培养样本，小鼠原发结肠癌组织以及人类结肠癌组织三种不同的免疫组化样本进行成像，发现无论是类器官培养样本还是小鼠原发结肠癌组织样本，PP2A的失活都导致错配修复蛋白MLH1蛋白水平降低。
#02
人类MSS 和MSI型结肠癌免疫组化样本分析
在对人类MSS和MSI型结肠癌免疫组化样本分析时，再次利用TissueGnostics公司单细胞定量分析软件HistoQuest对PP2A内源性抑制物，CIP2A和SET以及PP2A本身的蛋白表达水平进行了准确的定量，并以蛋白的阳性率的数值对表达水平进行了分级，HistoQuest为组织原位单细胞的定量数据提供了强有力的支持。







体内实验中，作者再次对利用TissueFAXS扫描成像系统和单细胞定量分析软件HistoQuest对人类MSS和MSI型结肠癌免疫组化样本中的p-HDAC2，p-Rb1进行分级定量，发现在MSI型结肠癌中p-HDAC2，p-Rb1的表达水平明显高于MSS结肠癌。最终结果表明pp2a的失活引起的Rb和HDAC2的磷酸化，从而导致沉默MLH1，诱导CRC的MSI状态。


#03
PP2A失活对肿瘤生长及抗PD-1的敏感性评估
作者发现与WT CT26细胞（MSS CRC细胞系）形成的肿瘤相比，Ppp2r1a基因敲除的CT26细胞形成的肿瘤中CD8+肿瘤浸润T细胞水平增加，其它实验也表明能够诱导新生抗原形成以及提高对ICB介导的抗肿瘤的敏感性，并且PP2A抑制剂LB100和抗pd1联合治疗可增效改善其抗肿瘤生长活性并提高生存期。同时，这也预示着PPP2R1A、SET和CIP2 A突变或者mRNA水平改变将有助于我们对ICB的反应预测，进一步提高精准医疗的水平。

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